Runtuyan génomik kalolobaan virus geus dipikawanoh.Panyilidikan asam nukléat nyaéta bagéan pondok DNA anu dirancang pikeun hibridisasi sareng DNA virus komplementer atanapi bagéan RNA.Réaksi ranté polimérase (PCR) nyaéta téknik anu langkung éfisién pikeun deteksi virus.Métode diagnostik throughput tinggi parantos dikembangkeun anyar-anyar ieu.
A. Téhnik hibridisasi asam nukléat
Hibridisasi asam nukléat, utamana kaasup Southern blotting (Southern) jeung Northern blotting (Northern), nyaéta téhnik anyar ngembang pesat dina widang diagnostik virus.Alesan pikeun uji hibridisasi nyaéta ngagunakeun bagéan pondok DNA (disebut "usik") dirancang pikeun hibridisasi sareng bagéan DNA atanapi RNA virus pelengkap.Ku pemanasan atawa perlakuan basa, DNA target untaian ganda atawa RNA dipisahkeun kana untaian tunggal lajeng diimmobilized dina rojongan solid.Sanggeus éta, usik ditambahkeun jeung hibridisasi jeung target DNA atawa RNA.Kusabab usik dilabélan ku isotop atawa nuklida non-radioaktif, target DNA atawa RNA bisa dideteksi ngaliwatan autoradiography atawa ku sistem biotin-avidin.Kusabab sabagéan ageung génom virus parantos diklon sareng diurutkeun, aranjeunna tiasa dideteksi nganggo sekuen virus-spésifik salaku panyilidikan dina spésimén.Ayeuna, métode hibridisasi ngawengku: dot blot , in situ hibridisasi dina sél , DNA blotting (DNA) (Southern blot) jeung RNA blotting (RNA) (Northern blot).
B.PCR Téhnologi
Dina taun-taun ayeuna, sababaraha téknik amplifikasi asam nukléat in vitro parantos dikembangkeun dumasar kana PCR, pikeun nguji virus anu teu peka atanapi henteu tiasa dibudidayakeun.PCR nyaéta métode nu bisa sintésis runtuyan DNA husus ku réaksi in vitro polimérase.Prosés PCR ngawengku siklus termal tilu hambalan: denaturation , annealing , sarta extension Dina suhu luhur (93 ℃ ~ 95 ℃), DNA untaian ganda dipisahkeun jadi dua untaian DNA tunggal;lajeng dina suhu low (37 ℃ ~ 60 ℃), dua primers nukléotida disintésis anneal kana bagéan DNA pelengkap;sedengkeun dina suhu anu pas pikeun énzim Taq (72 ℃), sintésis ranté DNA anyar dimimitian ti tungtung 3' primer ngagunakeun DNA komplementer salaku citakan sareng nukléotida tunggal salaku bahan.Jadi sanggeus unggal siklus, hiji ranté DNA bisa amplified kana dua ranté.Ngulang prosés ieu, unggal ranté DNA disintésis dina hiji siklus bisa dipaké salaku citakan dina siklus salajengna, sarta jumlah ranté DNA dua kali dina unggal siklus, nu hartina produksi PCR ieu amplified dina speed log 2n.Saatos 25 dugi ka 30 siklus, produksi PCR diidentifikasi ngaliwatan éléktroforésis, sareng produk DNA khusus tiasa dititénan dina sinar UV (254nm).Pikeun kaunggulan spésifisitas, sensitipitas, sareng genah, PCR parantos diadopsi dina diagnosis klinis seueur inféksi virus sapertos HCV, HIV, CMV, sareng HPV.Kusabab PCR sensitip pisan, éta tiasa ngadeteksi DNA virus dina tingkat fg, operasi kedah dilaksanakeun sacara saksama pikeun nyegah positip palsu.Salaku tambahan, hasil positif dina tés asam nukléat henteu hartosna aya virus inféksi hirup dina sampel.
Kalayan aplikasi téknik PCR anu lega, téknik sareng metode énggal dikembangkeun dumasar kana téknik PCR pikeun tujuan tés anu béda.Contona, PCR kuantitatif nyata waktu bisa ngadeteksi viral load;PCR in situ dipaké pikeun ngaidentipikasi inféksi virus dina jaringan atawa sél;PCR nested tiasa ningkatkeun spésifisitas PCR.Di antarana, PCR kuantitatif sacara real-time parantos dikembangkeun langkung gancang.Seueur téknik énggal, sapertos usik hidrolisis TaqMan, usik hibridisasi, sareng usik lantera molekular, parantos digabungkeun kana téknik PCR kuantitatif waktos nyata, anu seueur dianggo dina panalungtikan klinis.Di sagigireun ngaidentipikasi viral load dina cairan awak pasien sacara akurat, metode ieu ogé tiasa dianggo pikeun ngadeteksi mutant toleran ubar.Ku alatan éta, PCR kuantitatif sacara real waktos utamana diterapkeun dina évaluasi pangaruh kuratif sareng panjagaan kasabaran narkoba.
C. High-throughput deteksi asam nukléat viral
Pikeun nyumponan kabutuhan pikeun diagnosis gancang panyakit inféksi anyar anu muncul, rupa-rupa metode deteksi throughput tinggi, sapertos chip DNA (DNA), parantos diadegkeun.Pikeun chip DNA, panyilidikan husus disintésis jeung digantelkeun kana chip silikon leutik dina kapadetan luhur pisan pikeun ngabentuk DNA probe microarray (DNA) nu bisa hibridisasi jeung sampel.Sinyal hibridisasi tiasa digambar ku mikroskop confocal atanapi scanner laser sareng teras diolah ku komputer sareng set data ageung ngeunaan gen anu béda tiasa didapet.Aya dua jenis chip DNA."Chip sintésis" nyaéta kieu: oligonukleotida husus disintésis langsung dina chip.Séjén nyaéta chip kolam renang DNA.Gén kloning atanapi produk PCR dicitak sacara teratur dina slide.Kauntungannana téhnologi chip DNA nyaéta deteksi simultaneous tina jumlah badag runtuyan DNA.Versi panganyarna tina chip deteksi patogén tiasa ngaidentipikasi langkung ti 1700 virus manusa sakaligus.Téknologi chip DNA ngarengsekeun masalah metode hibridisasi asam nukléat tradisional sareng aplikasi anu lega pisan dina diagnosis virus sareng studi epidemiologis.
waktos pos: Dec-23-2020